english
français
RP2E INRA Université de Lorraine

Communications

Expression hétérologue de la protéase de paroi PrtH de Lactobacillus helveticus chez Streptococcus thermophilus LMD-9.

19e Colloque du Club des Bactéries Lactiques, 16-18 octobre, Bordeaux, France

Genay, M., Lecomte, X., Briard-Bion, V., Jardin, J., Lortal, S., Gagnaire, V., Dary, A.

2013

La croissance en lait de S. thermophilus et Lb. helveticus dépend de leur système protéolytique, notamment de CEP (Cell Envelope Proteinase) qui hydrolysent les caséines en peptides. Lb. helveticus et S. thermophilus présentent respectivement de 0 à 4 CEP (PrtH à PrtH4) et 0 à 1 CEP (PrtS). Connaître leur activité et spécificité de substrat indépendamment permettra d’orienter la protéolyse dans les produits fermentés selon les souches utilisées. La réalisation de mutants chez Lb. helveticus étant difficile, nous avons choisi d’exprimer de façon hétérologue le gène prtH dans une bactérie lactique naturellement transformable, protéolytique, et qui croît dans les mêmes conditions, S. thermophilus LMD-­9. Trois mutants ont été obtenus par remplacement de prtS de LMD-9 : i) PrtS- (prtS remplacé par ery), ii) PrtH+ (exprimant PrtH avec son propre domaine d’ancrage de type S-Layer) et iii) PrtH+WANS (exprimant PrtH avec l’ancrage de PrtS (motif LPXTG)). En lait, les gènes introduits présentent un niveau d’expression similaire à celui de prtS (RT-PCRq). Un shaving de la surface des cellules de S. thermophilus et de l’HPLC-MSMS a permis de détecter 18 protéines extracellulaires, dont HtrA et PrtS chez LMD-9 et PrtH chez les mutants PrtH+ et PrtH+WANS. La présence de formes ancrées immatures et matures de PrtS suggère une automaturation alors que seule la forme immature de PrtH a été détectée, suggérant cette fois-ci la nécessité d’une maturase, comme c’est le cas pour d’autres protéases. Ces résultats montrent que S. thermophilus est un bon outil pour exprimer et ancrer à la paroi des protéines hétérologues d’intérêt. Nos perspectives concernent maintenant la caractérisation de l’activité et de la spécificité des différentes CEP de Lb. helveticus.

 

Imprimer le document

167 Communications avant 2019

Imprimer le listing

2018

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2017

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2016

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2015

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2014

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2013

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2012

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2011

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2010

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2009

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2008

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2007

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2006

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2005

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2004

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

2003

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

1998

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

1997

C-ACTI - Communications avec actes dans un congrès international

Voir les productions récentes

Toutes les productions scientifiques