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RP2E INRA Université de Lorraine

Publications

Development of the recombinase-based in vivo expression technology in Streptococcus thermophilus and validation using the lactose operon promoter

Journal of Applied Microbiology, 116 (3), pp. 620-631.

Junjua, M., Galia, W., Gaci, N., Uriot, O., Genay, M., Bachmann, H., Kleerebezem, M., Dary, A., Roussel, Y.

2014

Objectifs

Construire et valider l'outil R-IVET chez Streptococcus thermophilus (ST)

Matériel et méthodes et Résultats

Le système R-IVET que nous avons construit dans la souche LMD-9 comprend le plasmide pULNcreB qui permet la fusion transcriptionnelle avec le gène codant le recombinase site-spécifique Cre et la cassette chromosomique contenant un gène de résistance à la spectinomycine flanqué par 2 sites loxP. Sur milieu M17, les promoteurs des gènes codant la protéase PrtS, la protéine de choc thermique Hsp16 et l'opéron lactose ont conduit à la délétion de la cassette, indiquant une activité promotrice dans ces conditions. Le promoteur de l'opéron lactose était également activé durant le transit dans le tractus gastrointestinal d'une souris.

Conclusion

Le système R-IVET développé chez ST est relativement stable, fonctionnel, très sensible et peut être utilisé pour mesurer l'activité des promoteurs qui sont spécifiquement actifs in vivo.

Impact de l'étude

Cette première adaptation de l'outil R-IVET chez ST fournit un outil très précieux permettant une exploration de l'état physiologique de ST dans le TGI de mammifères, lors du processus de fermentation ou dans les produits laitiers.

 

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